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El peso corporal de los ratones debe determinarse sobre una base semanal para evaluar ganancia de peso adecuada. Después de aproximadamente 12 semanas de dieta o un diabetes tipo 1 revertida en ratones de tiempo seleccionado dependiendo de la hipótesis de investigaciónel fenotipo metabólico de los ratones es evaluado por un OGTT seguido de 1 semana de tiempo de recuperación y posteriormente un ITT.

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Figura 2. Métodos para el muestreo de sangre durante los experimentos diabetes tipo 1 revertida en ratones. Para la usa, así como por la ITT, donde se requiere tomar muestras de sangre repetidas, se recomienda extraer sangre mediante corte con cuidado un pedazo de mm de la punta de la cola con unas tijeras afiladas variante Aseguido por la determinación diabetes tipo 1 revertida en ratones more info de glucosa en sangre con un glucómetro y mayor colección de la sangre con un capilar para determinar los niveles de insulina y otros valores relevantes de la sangre.

Alternativamente, sangre también podría ser muestreada a través de la vena de la cola variante B o por cateterización arterial no mostrado. Figura 3.

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Sonda oral de glucosa a y la inyección de insulina intraperitoneal b. Ver protocolo para una descripción detallada.

Figura 4. Mientras que los ratones en HFD mostraron un aumento esperado en el peso corporal, especialmente en las diabetes tipo 1 revertida en ratones semanas de dieta, LFD-alimentó los ratones mostraron peso corporal casi constante durante el período observado.

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Figura 5. Los niveles de glucosa en el grupo de HFD fueron elevados en el estado de ayuno, así como después de glucosa.

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HFD-alimentó ratones no sólo compensadas la inyección de glucosa con un mayor incremento en los niveles de insulina de la sangre, también inició y terminó la OGTT con niveles de insulina elevados en comparación con el grupo de control. Figura 6.

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Los diabetes tipo 1 revertida en ratones de glucosa en sangre no fueron continue reading adecuadamente en los ratones alimentados de HFD después de la inyección de insulina.

Para calcular la base corregida inversa AUC, los niveles de glucosa basal momento 0 se resta de todos después de obtenidos los niveles de glucemia para cada ratón individualmente. Como consecuencia del mayor nivel de glucosa en diabetes tipo 1 revertida en ratones alimentados con HFD durante OGTT, la línea de base corregido inversa que AUC fue menor en los ratones alimentados de HFD en comparación con ratones control, que sugirieron la sensibilidad de insulina disminuida.

Suplementario Figura 1. Lista de verificación para la preparación del experimento de. Haga clic aquí para descargar este archivo.

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Suplementario Figura 2. Los niveles de insulina durante servicio. Como se esperaba, los ratones HFD exhibieron niveles fuertemente creciente de la insulina basal en comparación con el grupo de control.

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Con la alta prevalencia de diabetes y enfermedades asociadas en la población mundial, hay una necesidad para la investigación abordando el mecanismo molecular, prevención y tratamiento de la enfermedad El protocolo presentado describe métodos bien establecidos para la generación de ratones HFD, un robusto modelo animal read article para la investigación metabólica, así como la diabetes tipo 1 revertida en ratones de la OGTT y ITT, que son potentes herramientas diabetes tipo 1 revertida en ratones la evaluación de las alteraciones metabólicas de todo el cuerpo como resistencia a la insulina.

Mientras que la glucosa sirve como el principal estímulo para la secreción de insulina en un OGTT, el protocolo presentado puede ser modificado por co- aplicar otras sustancias como otros macronutrientes y las hormonas que se saben que modificar la respuesta de insulina 2. Del mismo modo, el protocolo ITT puede modificarse por la aplicación co- de otras sustancias p.

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Los investigadores deben ser conscientes que las respuestas neuroendocrinas a hipoglucemia, la secreción de insulina, acción de la insulina así diabetes tipo 1 revertida en ratones el fenotipo metabólico general dependen fuertemente del fondo genético de los ratones Precauciones durante el diseño experimental incluyen pruebas de ratones de edad comparable, como disminución de la sensibilidad de insulina con edad de 24 y llevar a cabo los experimentos en ratones del mismo sexo.

Como tratamientos y las mutaciones genéticas pueden provocar diversos fenotipos dependiendo de sexo 2526también puede ser aconsejable investigar ambos sexos por separado uno del otro.

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El método de muestreo de sangre descrito en el presente Protocolo no requiere anestesia, que puede influir en la frecuencia cardíaca, flujo sanguíneo y metabolismo de la glucosa, produciendo resultados no fisiológico Detener el flujo de sangre aplicando presión con el dedo sobre el tejido blando de al menos diabetes tipo 1 revertida en ratones s antes de regresa el animal a su jaula. Vacíe el tubo capilar mediante una pipeta poniendo la punta de la pipeta en la parte superior del extremo del tubo diabetes tipo 1 revertida en ratones y con cuidado empujar la sangre recogida en un pocillo de la placa de 96 pocillos, evitando burbujas de aire.

Repita este procedimiento para todos los ratones - uno a la vez. Estrictamente evitar el contacto de la jalea de petróleo con sangre o glucómetro Optium, como pueden influir en las mediciones sucesivas de glucosa e insulina.

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Nota: Las directrices pueden limitar la cantidad permisible de sangre recogido dentro de un período determinado. El peso corporal de los ratones pueden usarse para calcular el total retiro permitido de la sangre.

Administración de glucosa Preparación de everythingthat es necesario durante el experimento entero por adelantado temporizador, hoja de registro del experimento, glucosa monitor y tiras, tubos capilares, jeringas, solución de glucosa, placa de 96 pocillos, bisturí, calculadora, balanza, marcador permanente, papeles de banco, link pipeta con una punta y guantes.

Para el uso de glucosa, refrena el ratón agarrando firmemente por el pescuezo.

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  8. Preparación del paciente.

Nota: Una vez iniciada la administración de glucosa, administración del tiempo es muy importante. Administrar con cuidado la solución de glucosa basada en paso 2.

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Directo con cuidado la aguja de alimentación a través de la boca hacia el esófago. Luego inyectar la solución de glucosa figura 3a.

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Si encuentra alguna resistencia, o si el animal lucha inmediatamente, retire la aguja y vuelva a colocarlo. No aplique presión al insertar la aguja de alimentación como esto puede dañar seriamente el animal.

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Que los ratones mover tan libremente como sea posible y el límite de restricción al mínimo durante todo el procedimiento para reducir el estrés, que puede modificar los resultados. Leche la cola con una mano y recoger la sangre con la otra.

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Repita el paso 2. Cuando haya terminado el experimento, retomar los ratones sus jaulas hogar equipados con alimentos y agua.

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Por lo tanto, esperar al menos 1 semana antes de realizar la siguiente prueba metabólica, como un ITT. Después del experimento, centrifugar las muestras de sangre a 2.

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Determinar los niveles de la insulina del plasma utilizando un ELISA disponible comercialmente kit véase la Tabla de materiales siguiendo las instrucciones del fabricante del kit. Por otro lado, si ratones alcanzan el pico de insulina durante OGTT, especialmente en los ratones alimentados de HFD, los niveles de insulina pueden exceder el límite de detección: diluir la muestra por ejemplo10 veces con 0.

Hemólisis en muestras de plasma puede conducir a la degradación de la insulina, resultando en una diabetes tipo 1 revertida en ratones de los valores de lectura.

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Nota: La ITT se realiza generalmente después de un corto ayuno para evitar la hipoglucemia que puede ocurrir lo contrario en la noche los animales en ayunas.

Todos los reactivos que se administran a los diabetes tipo 1 revertida en ratones deben ser grado farmacológico y estéril.

Medir el peso corporal de los ratones, marcar la cola, cortar la punta de la cola con unas tijeras afiladas y medir niveles de glucosa en sangre basal como se describe anteriormente para el SOG en el paso 2.

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A pesar del control de la enfermedad mediante las inyecciones de insulina, éstos pacientes suelen desarrollar graves complicaciones secundarias como por ejemplo ceguera, daño renal o amputación de extremidades. Combined effects of insulin treatment and adipose tissue-specific agouti expression on the development of obesity.

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Am J Physiol ; 1 Pt 2 : H Bono VH, Jr. Review of mechanism of action studies of the nitrosoureas.

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Diabetes tipo 1 Tras el descubrimiento de la insulina, la disponibilidad de modelos animales para el estudio de la patogénesis de la diabetes tipo 1 se demoró sin embargo otros 50 años. Diabetes tipo 2 EnG.

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Modelos intrínsecos Existen multitud de modelos portadores de mutaciones localizadas que resultan en rasgos fenotípicos imitando alguna de las manifestaciones clínicas de la DM2. Los tipos de manipulaciones que afectan a un gen específico y que pueden interesar para producir un modelo son: a Sobreexpresión, da lugar a ratones llamados transgénicos.

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Issue doi: Nagy, C. Click here for the english version. For other languages click here. A pesar de progresos considerables en la comprensión del metabolismo de la glucosa, los mecanismos moleculares de la regulación en salud y la enfermedad siguen bajo investigación, mientras que se necesitan urgentemente nuevos enfoques para prevenir y tratar la diabetes. Sobrealimentación disparadores meta-inflamación diabetes tipo 1 revertida en ratones, que conduce a alteraciones en la insulina periférica asociado a receptor de señalización y por lo tanto reduce la sensibilidad a la disposición de glucosa mediada por insulina.

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Estos eventos resultan en elevados de glucosa en ayunas y los niveles de insulina así como una reducción en here tolerancia a la glucosa, que a su vez sirven como indicadores importantes de resistencia a la insulina. Aquí, presentamos un protocolo para la generación y caracterización metabólica de la dieta alta en grasas HFD -alimentó ratones como modelo frecuente de resistencia a la insulina inducida por la dieta.

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Ilustramos detalladamente la prueba de tolerancia oral a la glucosa OGTTque supervisa la disposición periférica de una secreción source insulina y carga de glucosa por vía oral con el tiempo. Estos métodos y sus aplicaciones posteriores constituyen herramientas poderosas para caracterizar el fenotipo metabólico general de ratones, así como para evaluar específicamente alteraciones en el metabolismo de la glucosa.

Insulina y sus hormonas contador-reguladoras glucagón sirven como los principales reguladores del equilibrio oferta y macronutrientes energía diabetes tipo 1 revertida en ratones, manteniendo así también sangre sistémica adecuada glucosa concentraciones 2.

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Una amplia gama de modelos animales con inducción genética, nutricional o experimental de la enfermedad han https://bsc.whose.press/155.php para ser excelentes herramientas para el estudio de los mecanismos moleculares de resistencia a la insulina y varias formas de diabetes, así como sus enfermedades acompañantes 7.

Los diabetes tipo 1 revertida en ratones descritos pueden ser herramientas muy poderosas para investigar la influencia de la genéticas, farmacológicos, dieta y otros factores ambientales sobre el metabolismo de la glucosa de todo el cuerpo y sus enfermedades asociadas como resistencia a la insulina.

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Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Tenga en cuenta que todos los procedimientos descritos en este protocolo sólo deben realizarse después de la aprobación institucional y gubernamental, así como por el personal que es diabetes tipo 1 revertida en ratones competente.

Nota: Las mismas precauciones descritas para OGTT manejo de ratones, sangre, glucómetro y uso de la jalea de petróleo también deban aplicarse cuando se realiza la ITT.

Para la ITT, la posterior recogida de muestras de sangre con tubos capilares es opcional.

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La figura 1 muestra un esquema horario para fenotipado metabólico de ratones con una dieta. En una edad de aproximadamente 6 semanas, los ratones deben colocarse en un HFD, mientras que un grupo de LFD puede servir como el grupo de control.

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diabetes tipo 1 revertida en ratones Cada cohorte de ratones para los experimentos de la dieta debe consistir de al menos 10 ratones porque estos experimentos de read more son lentos, y afloramientos son frecuentes por ejemploratones no ganando peso o ratones con niveles de insulina o glucosa anormal. Después del período seleccionado de tiempo dependiendo de la hipótesis del estudio y el momento de los cambios esperadospueden realizarse para la evaluación de la acción de insulina y la tolerancia de la glucosa OGTT y ITT.

En este trabajo, se eligieron momentos finales para la prueba metabólica. Importante, diabetes tipo 1 revertida en ratones haber un tiempo de recuperación de al menos 1 semana entre la OGTT y ITT como estos experimentos conducen a la pérdida sustancial de sangre y por lo tanto son muy estresantes para los ratones.

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El consumo de HFD dio lugar a un diabetes tipo 1 revertida en ratones significativo en el peso corporal como se muestra en la figura 4. A las 6 semanas de edad, el peso del cuerpo fue 20,2 g en ambos grupos. Como el volumen de sangre es limitado en pequeños roedores, un ensayo de point-of-care POC para los seres humanos diabéticos glucómetro fue utilizado para monitorear niveles de glucosa en sangre durante los experimentos de fenotipado metabólico.

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Figura 5 presenta el curso temporal de insulina absoluta y absoluta glucosa figura 5a — b figura 5 c niveles durante la OGTT. Mientras que los niveles de insulina estaban casi sin cambios en el grupo control, los ratones alimentados un HFD demostraron fold elevados en comparación con el grupo de control, así como una respuesta grandemente creciente de la insulina, indicando HFD-inducida de la hiperinsulinemia compensatoria como el ayuno un intento de contrarrestar la capacidad de eliminación disminuida diabetes tipo 1 revertida en ratones la glucosa, que puede ser causada por resistencia a la insulina.

En este ensayo, el grado a que la sangre las concentraciones de glucosa caen después de la administración de insulina representa la eficacia de la acción de la insulina de todo el cuerpo. Los ratones alimentados de HFD mostraron una reducción deterioro de niveles de glucosa en sangre en comparación con el grupo de control alimentado por la LFD, en todos los puntos de tiempo en el ITT, por lo tanto, lo que sugiere diabetes tipo 1 revertida en ratones a la insulina.

Si los grupos que se comparan tienen similar ayuno niveles de glucosa en sangre que no es el caso de este experimentolos niveles de glucosa durante ITT pueden presentarse como el porcentaje de glucosa basal. Durante HFDs y posterior metabólicos experimentos fenotípicos, afloramientos pueden ocurrir con frecuencia.

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En este estudio, como ejemplo nos demostró interpretar datos de metabólicas experimentos en vivohabía realizado en ratones con obesidad inducida por dieta, intolerancia a la glucosa y resistencia a la insulina y compararon con un grupo control con peso corporal normal.

Figura 1.

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Esquema horario para un régimen de dieta sugerida y metabólicas experimentos en vivo. Para investigar los efectos metabólicos de HFD en ratones, los animales del grupo experimental se colocan en HFD en aproximadamente 6 semanas de edad, mientras que el grupo de control recibe un LFD.

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El peso corporal de los ratones debe determinarse sobre una base semanal para evaluar ganancia de peso adecuada. Después de aproximadamente 12 semanas de dieta diabetes tipo 1 revertida en ratones un punto de tiempo seleccionado dependiendo de la hipótesis de investigaciónel fenotipo metabólico de los ratones es evaluado por un OGTT seguido de 1 semana de tiempo de recuperación y posteriormente un ITT.

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Figura 2. Métodos para el muestreo de sangre durante los experimentos metabólicos.

Para la usa, así como por la ITT, donde se requiere tomar muestras de sangre repetidas, diabetes tipo 1 revertida en ratones recomienda extraer sangre mediante corte con cuidado un pedazo de mm de la punta de la cola con unas tijeras afiladas variante Aseguido por la determinación de niveles de glucosa en sangre con un glucómetro y mayor colección de la sangre con un capilar para determinar los niveles de insulina y otros valores relevantes de la sangre.

Alternativamente, link también podría ser muestreada a través de la vena de la cola variante B o por cateterización arterial no mostrado.

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Figura 3. Sonda oral de glucosa a y la inyección de insulina intraperitoneal b.

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Ver protocolo para una descripción detallada. Figura 4. Mientras que los ratones en HFD mostraron click aumento esperado en el peso corporal, especialmente en las primeras semanas de dieta, LFD-alimentó los ratones mostraron peso corporal casi constante durante el período observado.

Figura 5. Los niveles de glucosa en el grupo de HFD fueron elevados en el estado de ayuno, así como después de glucosa.

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HFD-alimentó ratones no sólo compensadas la inyección de glucosa con un mayor incremento en los niveles de insulina de la sangre, también inició y terminó la OGTT con niveles de insulina elevados en comparación con el grupo de control. Figura 6. Los niveles de glucosa en sangre no fueron bajados adecuadamente en los ratones alimentados de Diabetes tipo 1 revertida en ratones después de la inyección de insulina.

Desde el siglo XIX Harley y Lancearoux sospecharon la existencia de dos tipos de diabetes, esto era vital ya que los niños y adultos jóvenes morían tempranamente.

Para calcular la base corregida inversa AUC, los niveles diabetes tipo 1 revertida en ratones glucosa basal momento 0 se resta de todos después de obtenidos los niveles de glucemia para cada ratón individualmente. Como consecuencia del mayor nivel de glucosa en ratones alimentados con HFD durante OGTT, la línea de base corregido inversa que AUC fue menor en los ratones alimentados de HFD en comparación con ratones control, que sugirieron la sensibilidad de insulina disminuida.

Suplementario Figura 1. Lista de verificación para la preparación del experimento de. Haga clic aquí para descargar este archivo. Suplementario Figura 2.

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Los niveles diabetes tipo 1 revertida en ratones insulina durante servicio. Como se esperaba, los ratones HFD exhibieron niveles fuertemente creciente de la insulina basal en comparación con el grupo de control. Con la alta conclusión del tema de diabetes y enfermedades asociadas en la población mundial, hay una necesidad para la investigación abordando el mecanismo molecular, prevención y tratamiento de la enfermedad El protocolo presentado describe métodos bien establecidos para la generación de ratones HFD, un robusto modelo animal utilizado para la investigación metabólica, así como la conducción de la OGTT y ITT, que son potentes herramientas para la evaluación de las alteraciones metabólicas de todo el cuerpo como resistencia a la insulina.

Mientras diabetes tipo 1 revertida en ratones la glucosa sirve como el principal estímulo para la secreción de insulina en un OGTT, el protocolo presentado puede ser modificado por co- aplicar otras sustancias como otros macronutrientes y las hormonas que se saben que modificar la respuesta de insulina 2.

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Del mismo modo, el protocolo ITT puede modificarse por la aplicación co- de otras sustancias p. Los investigadores deben ser conscientes que diabetes tipo 1 revertida en ratones respuestas neuroendocrinas a hipoglucemia, la secreción de insulina, acción de la insulina así como el fenotipo metabólico general dependen fuertemente del fondo genético de los ratones Precauciones durante el diseño experimental incluyen pruebas de ratones de edad comparable, como disminución de la sensibilidad de insulina con edad de 24 y llevar a cabo los experimentos en ratones del mismo sexo.

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Como tratamientos y las mutaciones genéticas pueden provocar diversos fenotipos dependiendo de sexo 25 diabetes tipo 1 revertida en ratones, 26 diabetes tipo 1 revertida en ratones, también puede ser aconsejable investigar ambos sexos por separado uno del otro. El método de muestreo de sangre descrito en el presente Protocolo no requiere anestesia, que puede influir en la frecuencia cardíaca, flujo sanguíneo y metabolismo de la glucosa, produciendo resultados no fisiológico Alternativamente, puede ser necesario implantar un catéter arterial, que permite el muestreo vascular sin manejar el estrés durante el experimento, pero también agrega esfuerzo, costes así como el riesgo de pérdida de animales para el experimento.

Como los ritmos circadianos tiene un fuerte efecto sobre el metabolismo de glucosa sistémica 28es importante considerar en qué momento del día se llevan a cabo los experimentos descritos aquí. La ruta descrita de administración también puede variar dependiendo de la hipótesis específica siendo probada.

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Excursiones de glucosa e insulina significativamente diferencian dependiendo de la ruta de entrega solicitadas. Asimismo, la administración de glucosa intravenosa se caracteriza por una respuesta de insulina retrasada Por otra parte, la glucosa los niveles se source medir en las muestras del plasma recogidas, por ejemplopor totalmente automatizado analizadores de química en los laboratorios rutinarios.

Si gluconeogénesis necesita ser evaluado, puede aplicarse la prueba de tolerancia a piruvato PTTque es otra variante de los protocolos descritos aquí, diabetes tipo 1 revertida en ratones glucémico excursiones después de la administración de un bolo de piruvato Esta investigación fue apoyada por el fondo científico médico del alcalde de la ciudad de Viena y la Österreichische Gesellschaft für Laboratoriumsmedizin und Klinische Chemie.

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